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Aislamiento de células mononucleares de sangre periférica

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Aislamiento de células sanguíneas

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¿Preocupado de que no funcione? No es necesario, después de la medición de campo, el efecto se muestra en la figura siguiente.

¿Le preocupa que la imagen sea falsa? No hace falta. Podemos hacerlo en el momento. Las células mononucleares de la sangre periférica humana se aislaron de la sangre periférica. Las células mononucleares de la sangre periférica (PBMC) son células mononucleares de la sangre periférica, incluyendo linfocitos y monocitos.

La gravedad específica de las células mononucleares (linfocitos y monocitos) en la sangre periférica está entre 1,075 y 1,090, los eritrocitos y los granulocitos están entre 1,092 y 1,030 a 1,035, por lo que una solución con gravedad específica entre 1,075 y 1,092, que es casi isotónica, puede utilizarse para la centrifugación en gradiente de densidad. Las células de una determinada proporción se separan según la correspondiente distribución del gradiente de densidad.

Los requisitos básicos para los medios separados son:

(1) no ser tóxico para las células

② isotónico básico

③ insoluble en plasma y sustancias separadas

④ Hay una gravedad específica.

La solución de separación de Ficoll (dos partes de solución de agua destilada con polisucrosa al 6% mezclada con una parte de solución salina normal con panditumina al 34%) era la solución convencional de separación de linfocitos con una gravedad específica de 1,077 ±0,002, que se utilizaba principalmente para el aislamiento de células mononucleares de la sangre periférica.

Pasos separados

1. Tomar sangre entera fresca anticoagulante y utilizar un tubo de centrífuga de 15 ml

2. Añada una cantidad adecuada de líquido de separación en el tubo de centrífuga y dilúyalo 1:1 hasta obtener una solución de 10 ml.

3. Poner el tubo en una centrífuga de baja velocidad con un rotor horizontal de 800xg y centrifugar durante 20min

Después de la centrifugación, habrá una estratificación obvia: la capa superior es la capa de plasma diluido, el medio es la capa de líquido de separación transparente, la membrana blanca entre el plasma y el líquido de separación es la capa de células mononucleares, y el fondo del tubo de centrifugación son los glóbulos rojos y los granulocitos.

La centrífuga de baja velocidad de Kecheng, le permite utilizarla con facilidad