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Anticuerpos de la purificación usando Ion Exchange Chromatography

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La cromatografía de intercambio iónico (IEC) es un método cromatográfico usado para separar compuestos biológicos. La base de la separación en el IEC es adsorción reversible (absorción superficial) de moléculas cargadas sobre una fase inmóvil.

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La fase inmóvil se hace de los grupos de intercambio iónico inmovilizados que tienen la carga opuesta como el componente de la blanco que debe ser llevado en la fase móvil. Generalmente, los experimentos de intercambio iónico se realizan en cinco etapas.

¿Se realiza cuál es IEC y cómo él?

La primera fase de IEC se llama equilibrio. Durante este proceso, la fase inmóvil de intercambio iónico se equilibra para asegurarse de que está actuando en las condiciones del pH optimizado y de la fuerza iónica para maximizar la adsorción del componente polar de la blanco de la fase inmóvil.

La superficie del intercambio es una resina que comprende una matriz de grupos funcionales o de ligands ionizables cargados. Esta fase inmóvil exhibe a estos grupos funcionales que formen interacciones iónicas con el ion del analito de la carga de oposición. Es importante mantener el electroneutrality, que es el estado en el cual la carga neta del sistema es cero. Counterions está presente en la solución del equilibrio.

En la segunda etapa, el presente polar del analito de la blanco en la fase móvil de la muestra debe competir con los counterions para la adsorción a la fase móvil. Este resultados de proceso en la dislocación del counterion; cualquier componentes que no puedan atar el paso a través de la columna y se enjuagan inmediatamente.

En la tercera fase, la desorción de los analitos encuadernados ocurre. Esto es alcanzada alterando las condiciones obligatorias, principalmente cambiando el pH o aumentando la fuerza iónica del almacenador intermediario de la elución.

En el último método, un almacenador intermediario de la elución de la concentración cada vez mayor de la sal se aplica a la columna y los analitos se lanzan de la resina en orden de fuerza obligatoria cada vez mayor. Esto ocurre porque la concentración del counterion aumenta y compite con los analitos encuadernados. Los analitos mal obligatorios se lanzan primero, mientras que esos analitos capaces de la vinculación iónica fuerte son pasados enjuagado.

El del cuarto piso se categoriza para el final de la desorción, y en el quinto y el estadio final, se regenera la columna. La regeneración reajusta la columna así que puede ser utilizada para otra purificación. La separación de analitos polares dentro de una mezcla compleja es posible porque sus diferencias en la carga neta, la densidad de carga, y la distribución de carga permiten la interacción diferenciada con la superficie de intercambio iónico inmóvil. La dinámica de su interacción con la superficie de intercambio iónico puede ser manipulada variando la fuerza iónica y el pH de la fase móvil durante la elución.

Las propiedades de la carga de moléculas biológicas son notables; la cromatografía de intercambio iónico es ventajosa al separar las proteínas, pues proporciona la separación de alta resolución entre las proteínas que diferencian solamente por un solo aminoácido.

separación IEC-basada del anticuerpo

Hay varios procesos cromatográficos que facilitan el aislamiento de anticuerpos aprovechándose de diversas propiedades bioquímicas. La separación basada en tamaño, el hydrophobicity, la solubilidad, y la afinidad de atascamiento son los ejemplos se han utilizado que. Importantemente, las diversas propiedades de la carga de anticuerpos los hacen favorables a la purificación por el IEC;

Los anticuerpos son moléculas biológicas proteicas, y sus proteínas de la carga se pueden manipular usando el IEC. La carga neta de las moléculas del interés determina el tipo de IEC que puede ser utilizado. Si positivamente - se eligen los compuestos cargados son la blanco que se capturará por la fase móvil, una resina del intercambio catiónico. Inversamente, - cargó la resina del intercambio de aniones se selecciona cuando negativamente - las moléculas cargadas deben positivamente ser inmovilizadas.

Las resinas mas comunes usadas en protocolos de la purificación del anticuerpo son gotas de la agarosa de la proteína A. Hay una variedad de otras resinas disponibles en el comercio que pueden ser utilizadas, sin embargo. La capacidad de enlace de la resina, así como la longitud de la columna, determina el número de ciclos del IEC que se deban emprender para procesar los anticuerpos que se rinden del sobrenadante de las células dirigidas para expresar altas cantidades del anticuerpo deseado.

Las resinas del intercambio catiónico se han divulgado para producir altas producciones y para reducir la cantidad de la proteína de la célula huesped (HCP); HCPs es las impurezas proceso-relacionadas que se derivan de la célula huesped de la expresión de proteínas recombinantes, biotherapeutic, tales como anticuerpos. Además, el proceso es altamente selectivo, tal ese atascamiento es específico a la región constante de anticuerpos.

Los anticuerpos están llegando a ser cada vez más frecuentes como agentes terapéuticos en el tratamiento de diversas enfermedades como artritis y cáncer. Por lo tanto, el valor de mercado de anticuerpos está aumentando. Los anticuerpos monoclonales (MAb) son producidos por las células mamíferas y poseen la misma estructura. La pureza de estas poblaciones clónicas es esencial para la eficacia clínica.

Los títulos del MAb están típicamente tan arriba como 5 a 10 g/l, pero su purificación rio abajo crea un embotellamiento en su producción final. El IEC proporciona un método por el cual los anticuerpos se puedan purificar con la altas producción y selectividad.