Fotometría de fibra: una guía de usuario definitiva y descripción general

¿Qué es la fotometría de fibra? ¿Cómo configurar una operación de fotometría de fibra? ¿Cómo elegir los accesorios de fotometría de fibra más eficientes? Nuestra guía completa sobre el sistema de fotometría de fibra puede darle todas las respuestas.

Esta guía consta de 4 capítulos que están organizados según las diferentes fases del viaje de la fotometría de fibra.

El Capítulo 1 introduce los conocimientos básicos del sistema de fotometría de fibra.

El Capítulo 2 explica el principio de funcionamiento, las ventajas y muestra los pasos para configurar el experimento relevante.

El Capítulo 3 elabora las funciones de diferentes modelos de fotometría de fibra y proporciona estudios de casos exitosos para mostrar la gama de aplicaciones.

El Capítulo 4 brinda recomendaciones sobre cómo elegir los accesorios de fotometría de fibra más eficientes para mejorar el experimento en la práctica.

En caso de que sepa poco sobre fotometría de fibra...

El sistema de fotometría de fibra es un método de imagen óptica que permite a los investigadores detectar la actividad de grandes poblaciones neuronales en animales que se mueven libremente durante un largo período de tiempo, lo que ayuda a explorar la correlación entre la actividad neuronal y el comportamiento animal.

Capítulo 1: Guía de aprendizaje de fotometría de fibra para principiantes

Breve introducción:

La fotometría de fibra es un método óptico que se basa en el principio de medir la luz emitida por moléculas fluorescentes a través de fibra óptica basada en el conteo de fotones individuales correlacionados con el tiempo (TCSPC). A partir de este principio, sabemos que la realización de este experimento requiere herramientas de sonda que puedan expresar fluorescencia en el tejido, así como un conjunto de equipos que puedan transmitir fluorescencia y detectarla.

Luego miramos primero las herramientas de fluorescencia. Actualmente, las herramientas de fluorescencia más utilizadas se dividen en indicadores de calcio, indicadores de neurotransmisores, indicadores de voltaje, etc. Debido a que hay muchos tipos de modelos animales para aplicaciones experimentales, y también necesitamos estudiar regiones cerebrales específicas o incluso tipos específicos de células, las técnicas de edición de genes se han utilizado ampliamente para el desarrollo de sondas.

Los indicadores de calcio codificados genéticamente (GECI) comunes son proteínas fluorescentes derivadas de la proteína verde fluorescente (GFP, etc.) y sus variantes (p. dominio de la quinasa de cadena ligera de miosina. Cuando Ca2+ está presente, se une a CaM, lo que lleva a la interacción entre los dominios estructurales M13 y CaM, lo que desencadena un reordenamiento estructural de cpEGFP, que mejora la señal de fluorescencia verde/roja.

Los GECI más utilizados son: GCaMP, Pericams, Cameleons, TN-XXL y Twitch, entre los cuales GCaMP6, GCaMP7 ahora se utilizan ampliamente en estudios de imágenes de calcio in vivo debido a su sensibilidad superior. El siguiente es un resumen de los tipos de GECI comunes.

Capítulo 2: Más información sobre la fotometría de fibra: principio de funcionamiento y proceso

Por ejemplo, las ventajas de la fotometría de fibra.

El estudio del sistema nervioso de animales despiertos y que se mueven libremente es un tema crucial en la investigación neurocientífica contemporánea. Al detectar señales de calcio asociadas con la actividad neuronal, podemos comprender mejor los circuitos neuronales complejos. En los últimos años, los desarrollos tecnológicos que incluyen la microscopía de dos fotones, la microscopía de un solo fotón y la fotometría de fibra nos han permitido realizar la detección en tiempo real de cambios en las señales de calcio en animales. La aplicación de estas técnicas requiere proteínas fluorescentes diseñadas.