¿Cómo obtener secciones de parafina de alta calidad?

Este texto le proporcionará los métodos detallados para cortar secciones de parafina cualificadas.

El seccionamiento en parafina es el método más utilizado para la preparación de secciones histológicas. Sin embargo, hay algunas cuestiones que nos planteamos a menudo al cortar el tejido incluido en parafina: ¿Por qué no se puede recortar el bloque de cera con suavidad? ¿Por qué es fácil que se rompan y enrollen las secciones durante el corte? ¿Por qué las secciones no se pueden aplanar durante el extendido? Este texto le proporcionará los métodos detallados para cortar secciones de parafina cualificadas.

Fijación correcta

Tras la separación del tejido, es necesario fijarlo en el plazo de 1 hora.

El líquido de fijación deberá ser de 4 a 10 veces el volumen del tejido y tener una concentración exacta. Un líquido excesivamente fino y abundante afectará a la forma del tejido y al efecto de fijación. En caso de descubrir cualquier deterioro del líquido estacionario, como la precipitación blanca del líquido de formaldehído, se requiere llevar a cabo una sustitución inmediata.

La temperatura de fijación debe ser la temperatura ambiente o en un procesador de tejidos totalmente cerrado de 35-37°C. Una temperatura excesivamente alta acelerará la autolisis tisular y la contracción excesiva y destruirá el antígeno y el ADN de las células.

El tiempo de fijación no superará las 40 horas y se ajustará en función de la temperatura ambiente y de las muestras.

Deshidratación adecuada

La clave de la deshidratación es hacer que el tiempo de deshidratación con alcohol de baja concentración coincida con el tiempo de deshidratación con alcohol de alta concentración. El alcohol de baja concentración puede reducir la contracción del tejido y facilitar el corte. El alcohol de alta concentración puede deshidratar aún más los tejidos.

Por lo general, el tiempo de deshidratación de las muestras (35°C) es de 1,5 horas para el alcohol al 75%, de 2 horas para el alcohol al 85%, de 1,5 a 2 horas para el alcohol al 95% (dos veces) y de 1,5 a 2 horas para el alcohol puro (dos veces). El tiempo de deshidratación de los especímenes pequeños difiere poco del de los especímenes grandes. Normalmente, no hay necesidad de separarlos (a menudo, los especímenes pequeños quebradizos son el resultado de un paquete de papel grueso o se pegan entre sí, lo que conduce a una deshidratación incompleta del tejido. Si el tiempo es urgente, se permite acortar adecuadamente el tiempo de deshidratación. La duración de la deshidratación está estrechamente relacionada con la temperatura ambiente, el grosor y el tipo de tejido, el grado de fijación del tejido, etc.).

La minuciosidad de la deshidratación está directamente relacionada con la transparencia del tejido. Si la temperatura es demasiado alta (más de 50 °C) o se utiliza acetona durante la deshidratación, es fácil que se produzca una contracción excesiva del tejido y que éste se endurezca y se vuelva quebradizo. Existen tres razones para la fragilidad de los tejidos causada por la deshidratación tisular:

Falsa fragilidad: debido a una deshidratación insuficiente, la parafina no puede penetrar en los tejidos cuando éstos se sumergen en cera. Si los tejidos se "cuecen" a alta temperatura, se volverán duros y quebradizos. Las secciones tendrán partes pulverulentas o filamentosas. Los tejidos duros, como el leiomioma uterino, también tendrán bordes y, en el peor de los casos, toda la sección se derrumbará hacia fuera. Los tejidos con deshidratación gravemente insuficiente se vuelven blandos e incluso tienen agua.

Puntos de funcionamiento de la sección en parafina

Antes de seccionar, apriete la varilla de bloqueo o el tornillo correspondiente en el micrótomo, de lo contrario, la sección puede saltar, y el grosor desigual de las secciones puede ocurrir.

Raspe los restos de parafina alrededor de la caja de incrustación, de lo contrario, la sujeción de la muestra puede aflojarse, afectando a la calidad de la sección.

Recorte correctamente el bloque y realice primero un recorte aproximado. El grosor es de unas 15-30 micras, y el tejido más duro o más pequeño debe ser más fino. Después del recorte grueso hasta que todos los tejidos estén expuestos, se puede realizar el recorte fino.

Se selecciona el modo de congelación de bloques de parafina, y la caja de hielo es superior a la mesa de congelación. Utilice un depósito de hielo para humedecer los bloques de parafina añadiendo agua. Tiene las ventajas de una rápida velocidad de congelación, tamaño pequeño, bajo coste de uso, y sin fuente de alimentación externa.

Durante el seccionamiento de la parafina, sujete suavemente el volante con fuerza uniforme y suave, y la agitación no debe ser ni demasiado rápida ni demasiado lenta. Si la velocidad es demasiado alta, dará lugar a un grosor de sección desigual y tendrá dificultades para expandir la sección. Si la velocidad es demasiado baja, espesará la sección. Las secciones deberán ser completas, finas y uniformes.

Después de seccionar con parafina, ponga primero la sección en agua fría y luego pásela a agua caliente, de modo que la sección será más fina y tendrá menos arrugas y burbujas. La temperatura del agua de la sección extendida deberá estar entre 42-55°C, lo que está relacionado con el punto de fusión de la parafina de inclusión. Si la temperatura del agua es demasiado alta, los tejidos y las células se dispersarán. Si la temperatura del agua es demasiado baja, las arrugas de las secciones no podrán aplanarse.