Protocolo de Diferentes Métodos de Inyección Intracraneal

En el campo de la investigación científica básica del cerebro, la inyección estereotáxica intracraneal es la forma más directa de lograr una inyección precisa en las regiones cerebrales objetivo, y se ha convertido en una parte importante de la mayor

Combinado con la fibra óptica correspondiente, también permite la estimulación óptica o el registro de señales neuronales de la región del cerebro objetivo durante o después de la inyección. Este método es ampliamente adoptado en modelos animales de enfermedades neurológicas humanas, funciones cerebrales avanzadas, emociones, cognición y otros estudios relacionados.

La inyección estereotáxica intracraneal generalmente se aplica en una sola administración y múltiples administraciones. Durante el experimento, se puede seleccionar el método apropiado según la frecuencia de inyección, el tiempo de inicio y la duración de la acción. En este documento, elaboraremos estos dos métodos en detalle, incluidos los SOP y los consejos.

POE de Administración Única Craneal

1 Instrumentos

Aparato estereotáxico

Máquina de anestesia para animales de laboratorio

Microbomba de jeringa

Extractor de micropipetas

2 Proceso y procedimiento

2.1 Anestesia animal preoperatoria

Encienda la máquina de anestesia animal. Coloque la rata en la caja de inducción para realizar la anestesia inducida. Una vez que la rata esté bajo anestesia, sáquela de la caja de inducción y transfiérala a la máscara de anestesia en el instrumento estereotáxico con una almohadilla térmica. Aplique [XY1] pomada ocular en sus ojos y prepare la piel.

2.2 Fijar el cráneo

2.2.1 Coloque el incisivo de la rata en el orificio de la máscara y atornille suavemente la pinza nasal.

2.2.2 Mueva la barra de la oreja de un lado a la posición adecuada y atorníllela en su lugar. Sostenga la cabeza de la rata suavemente y alinee la posición del agujero occipital grande en el mismo lado de la cabeza con la punta de la barra de la oreja, y empuje lentamente el otro lado de la barra de la oreja hacia el agujero occipital grande.

2.2.3 Ajuste la posición de las barras de las orejas en ambos lados hasta que las lecturas en los lados izquierdo y derecho sean iguales.

2.3 Haz un agujero en el cráneo

(2.3.1) Fije el microtaladro en el instrumento estereotáxico cerebral con el soporte para microtaladro y mueva lentamente el microtaladro para tocar el Bregma y establezca cero en la pantalla digital. Mueva lentamente el microtaladro para tocar la Lambda para registrar el valor de DV. Si el valor absoluto es inferior a 0,03 mm, el cráneo se puede considerar en posición horizontal; si es superior a 0,03 mm, es necesario ajustar la altura del adaptador y volver a calibrar las posiciones de Bregma y Lambda hasta que el valor absoluto de Lambda DV sea inferior a 0,03 mm.

2.3.2 Mueva el taladro craneal al punto medio de la línea de Bregma y Lambda y expanda los lados izquierdo y derecho en 0,3 mm. Toque suavemente la superficie craneal y registre los valores DV craneofaciales en los puntos izquierdo y derecho respectivamente. Si la diferencia absoluta es inferior a 0,03 mm, el cráneo se puede considerar en posición horizontal; si es superior a 0,03 mm, la altura de las dos barras de las orejas debe ajustarse hasta que la diferencia absoluta sea inferior a 0,03 mm.

2.3.3 Mueva lentamente el taladro craneal por encima del sitio objetivo. Encienda el taladro craneal, luego baje lentamente el taladro craneal mientras observa la broca bajo el microscopio hasta que llegue a la duramadre.

2.4 Inyección intracraneal

2.4.1 Use el capilar de vidrio para tirar del capilar de vidrio consultando los parámetros del programa de inyección.

2.4.2 Use una aguja de llenado para llenar el capilar de vidrio con aceite mineral y sacuda el capilar de vidrio hasta que se descarguen las burbujas en la punta.

2.4.3 Afloje el mandril de la bomba de inyección de micropipetas para empujar suavemente el capilar de vidrio hacia arriba y luego apriete el mandril.

2.4.4 Configure los parámetros para la velocidad de vaciado y el volumen de vaciado en la unidad de control y haga clic para ejecutar el vaciado.

2.4.5 Sumergir la punta del capilar en la solución a inyectar. Configure los parámetros para la velocidad de llenado y el volumen de llenado en la unidad de control y haga clic para realizar el llenado.

2.4.6 Fije la bomba de inyección de micropipetas en el brazo operativo. Después de restablecer la punta del capilar a cero, mueva el brazo operativo por encima del sitio de destino y descienda lentamente hasta la región del cerebro de destino.

2.4.7 Configure los parámetros de velocidad y volumen de inyección en la unidad de control y haga clic para ejecutar la inyección.

2.4.8 Después de la inyección, mueva lentamente la bomba de inyección de la micropipeta hacia arriba hasta que la punta del capilar de vidrio se elimine del tejido cerebral.

2.5 Sutura

2.5.1 Suture el cuero cabelludo con sutura estéril y luego aplique la pomada oftálmica de eritromicina para prevenir la inflamación de la herida.

2.6 Cuidados posquirúrgicos

2.6.1 Mantenga a la rata caliente durante 24 h después de la cirugía. Inyecte penicilina u otros antibióticos para prevenir infecciones y proporcione a la rata alimento y agua potable adecuados.

3 consejos

3.1 Después de que la punta del capilar de vidrio alcance el sitio objetivo, mantenga el capilar en el sitio de inyección durante 1 minuto para equilibrar la presión del aire antes de la inyección.

3.2 Para que el tejido cerebral absorba completamente el reactivo de la inyección, detenga la inyección durante 15 a 20 minutos después de la inyección y luego extraiga el capilar de vidrio.

3.3 Para reducir la fuga de reactivos en la trayectoria de movimiento del capilar de vidrio, se sugiere controlar la velocidad de entrada y salida de la aguja a 0,01 mm/s.

POE de Administración Múltiple Craneal

1 Instrumentos

Aparato estereotáxico

cánula de administración de medicamentos

Microbomba de jeringa

2 Proceso y procedimiento

2.1 Anestesia animal preoperatoria

2.1.1 Encienda la máquina de anestesia animal. Coloque la rata en la caja de inducción para realizar la anestesia inducida. Una vez que la rata esté bajo anestesia, sáquela de la caja de inducción y transfiérala a la máscara de anestesia en el instrumento estereotáxico con una almohadilla térmica. Aplique ungüento para ojos en sus ojos y afeite la piel de su cabeza para prepararla.

2.2 Fijar el cráneo

2.2.1 Coloque el incisivo de la rata en el orificio de la máscara y atornille suavemente la pinza nasal.

2.2.2 Mueva la barra de la oreja de un lado a la posición adecuada y atorníllela en su lugar. Sostenga la cabeza de la rata suavemente y alinee la posición del agujero occipital grande en el mismo lado de la cabeza con la punta de la barra de la oreja, y empuje lentamente el otro lado de la barra de la oreja hacia el agujero occipital grande.

2.2.3 Ajuste la posición de las barras de las orejas en ambos lados hasta que las lecturas en los lados izquierdo y derecho sean iguales.

2.3 Nivelación del cráneo

2.3.1 Fije el microtaladro en el instrumento estereotáxico cerebral con el soporte para microtaladro y mueva lentamente el microtaladro para tocar el Bregma y establezca cero en la pantalla digital. Mueva lentamente el microtaladro para tocar la Lambda para registrar el valor de DV. Si el valor absoluto es inferior a 0,03 mm, el cráneo se puede considerar en posición horizontal; si es superior a 0,03 mm, es necesario ajustar la altura del adaptador y volver a calibrar las posiciones de Bregma y Lambda hasta que el valor absoluto de Lambda DV sea inferior a 0,03 mm.

2.3.2 Mueva el taladro craneal al punto medio de la línea de Bregma y Lambda y expanda los lados izquierdo y derecho en 0,3 mm. Toque suavemente la superficie craneal y registre los valores DV craneofaciales en los puntos izquierdo y derecho respectivamente. Si la diferencia absoluta es inferior a 0,03 mm, el cráneo se puede considerar en posición horizontal; si es superior a 0,03 mm, la altura de las dos barras de las orejas debe ajustarse hasta que la diferencia absoluta sea inferior a 0,03 mm.

2.4 Haz un agujero en el cráneo

2.4.1 Mueva lentamente el taladro craneal por encima del sitio objetivo. Encienda el taladro craneal, luego baje lentamente el taladro craneal mientras observa la broca bajo el microscopio hasta que llegue a la duramadre cerebral.

2.4.2 Mueva lentamente el microtaladro y taladre dos pequeños orificios en la parte delantera y trasera de la región cerebral objetivo. Inserte los tornillos estériles suavemente en el cráneo con un destornillador.

2.5 Implantación de cánulas de administración de fármacos

2.5.1 Sujete la cánula guía y muévala lentamente a Bregma y restablezca el punto cero. Luego mueva la cánula guía por encima del sitio objetivo y descienda lentamente al área objetivo.

2.5.2 Aplique la cantidad adecuada de pegamento biológico a la abertura del cráneo.

2.5.3 Preparar cemento dental semiviscoso para rellenar entre tornillo y cánula guía, capa por capa, zona por zona.

2.5.4 Atornille firmemente la tapa de la cánula guía después de que el cemento dental se haya solidificado por completo.

2.6 Entrega de medicamentos con cánula

2.6.1 Usando el tubo de PE a través del tornillo de fijación y llene el tubo de PE y la aguja de inyección con aceite mineral. Después de llenar la jeringa con aceite mineral, use una pistola de pegamento para sellar la conexión entre el tubo de PE y la jeringa y vacíe el aceite mineral en la jeringa.

2.6.2 Fijar la jeringa en el tanque de propulsión de la bomba de jeringa. La bomba de jeringa realiza el procedimiento de succión e inhala el fármaco desde la punta de la cánula de inyección.

2.6.3 Retire la cánula ficticia. Inserte la cánula de inyección en la cánula guía

lentamente y apriete el tornillo de fijación.

2.6.4 Dejar reposar durante 1 min y permitir que los animales con tubo de inyección se adapten al entorno.

2.6.5 Configure los parámetros de inyección de la bomba de inyección y ejecute el procedimiento de inyección.

2.6.6 Después de la inyección, detenga la inyección durante 1 a 5 minutos. Luego, retire el tubo de inyección interno y vuelva a apretar la tapa del catéter. La inyección está completa.

2.7 Cuidados posquirúrgicos

Mantenga la rata caliente durante 24 h después de la cirugía. Inyecte penicilina u otros antibióticos para prevenir infecciones y proporcione a la rata alimento y agua potable adecuados.

3 consejos

3.1 Al perforar orificios en la posición donde se incrustan los tornillos craneales, se debe prestar especial atención para no perforar el cráneo y evitar daños en el tejido cerebral. Además, el lugar de perforación debe mantenerse lo más alejado posible del área de implantación de la cánula para evitar el bloqueo del tornillo craneal.

3.2 Para la implantación bilateral, implante primero la cánula única derecha para evitar la obstrucción espacial.

3.3 Aplicar el cemento dental capa por capa para solidificar la implantación.