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Innovaciones en el mundo de la secuenciación

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Cómo los inventos de Solis BioDyne pueden mejorar su secuenciación unicelular

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La secuenciación unicelular descubre la diversidad oculta entre células individuales, transformando la investigación desde el cáncer hasta la neurociencia, pero exige reactivos que protejan cada valiosa molécula. Aquí es donde entran en juego nuestras innovaciones.

¿Qué es la secuenciación unicelular?

La secuenciación unicelular es un conjunto de técnicas que permiten a los científicos analizar el material genético -ADN o ARN- de células individuales en lugar de una mezcla de muchas células. Esto es importante porque incluso las células de un mismo tejido pueden diferir en la expresión génica, las mutaciones o los estados reguladores. La secuenciación masiva tradicional no tiene en cuenta estas diferencias, pero los métodos unicelulares nos permiten ver directamente la diversidad celular.

Este método puede medir el ADN (secuenciación del genoma unicelular), el ARN (transcriptómica unicelular) y las marcas epigenéticas (ATAC-seq unicelular, metilación-seq).

Mientras que la secuenciación unicelular lee naturalmente ácidos nucleicos, los investigadores han desarrollado adaptaciones inteligentes para medir proteínas junto con ARN o ADN convirtiendo las señales de proteínas en formatos legibles por el ADN. El método más común, utilizado en CITE-seq y REAP-seq, se basa en anticuerpos marcados con códigos de barras de ADN únicos que se unen a proteínas específicas; durante la secuenciación, estos códigos de barras se capturan y cuantifican como ARNm, revelando la abundancia de proteínas. Otros métodos son los aptámeros de ADN que se unen directamente a las proteínas, los ensayos de ligadura o extensión por proximidad, en los que pares de anticuerpos generan etiquetas de ADN secuenciables cuando se unen cerca de la misma proteína, y la clasificación por índices mediante citometría de flujo seguida de secuenciación. Estos enfoques multiómicos son muy valiosos en distintos campos. Por ejemplo, en neurociencia pueden permitir distinguir subtipos celulares y rastrear respuestas inmunitarias o gliales en la enfermedad.

¿Qué productos innovadores puedo utilizar para este método?

En la secuenciación de ARN unicelular, los inhibidores de RNasas son esenciales para proteger el ARNm frágil de la degradación por las RNasas ubicuas, que se liberan en el momento en que se rompe una célula. Suelen incluirse en el tampón de lisis para salvaguardar los transcritos inmediatamente después de la disrupción y se mantienen durante los pasos de captura del ARN y transcripción inversa, garantizando que el ARN permanezca intacto hasta que se convierta en ADNc estable. En algunos protocolos, como los de RNA-seq de núcleo único o CITE-seq, también se añaden inhibidores de las RNasas durante el aislamiento de los núcleos o la permeabilización celular, cuando las membranas están comprometidas y las RNasas pueden difundirse libremente.

Un producto innovador diseñado para este desafío es nuestro inhibidor de RNasa RiboGrip® (220 U/µl), un inhibidor basado en proteínas y diseñado in silico que inactiva la RNasa A, la RNasa B y la RNasa C.

RiboGrip® también incluye una modificación genética - Stability TAG - nuestra tecnología propia y patentada de estabilización de polipéptidos. Esto hace que RiboGrip® sea extremadamente tolerante a temperaturas más altas y permite su envío a temperatura ambiente, así como su uso eficaz en ensayos que requieren altas temperaturas de incubación.las pruebas internas demuestran que RiboGrip® conserva toda su actividad tras 1 hora de incubación a 60 °C.

¿Por qué RiboGrip® es una buena elección para la secuenciación unicelular?

Alto volumen de concentración de 220 U/µL: ideal para volúmenes de reacción pequeños.
Estabilidad excepcional a temperaturas elevadas: estable 1 hora a 60 °C o hasta 1 mes a 25 °C - cómoda preparación de la reacción.
Fuerte inhibición de las RNasas eucariotas (A, B, C) para una máxima protección del ARN.
Eficaz a bajas concentraciones de DTT, preservando la calidad del ARN.
Compatible con RT-(q)PCR y flujos de trabajo NGS basados en ARN.
No se fíe sólo de nuestra palabra: Illumina señala: "RiboGrip® es la mejor opción para tipos de muestras difíciles, como las que tienen un menor contenido de ARN y/o una mayor cantidad de RNasa endógena (por ejemplo, plantas)" Puede obtener más información en sus materiales de formación sobre secuenciación unicelular.