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Después de leer este artículo, no diga que no conoce la tecnología PCR
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I. Qué es la PCR
La PCR, abreviatura de Reacción en Cadena de la Polimerasa, es un método para amplificar unas pocas o decenas de copias de ADN hasta millones de copias, y es una de las tecnologías más importantes hasta la fecha. La PCR se ha utilizado ampliamente en las pruebas de paternidad y en las investigaciones criminales.
La PCR puede considerarse una técnica similar al proceso de replicación del ADN que se produce en las células, que da lugar a la producción de nuevos fragmentos de ADN complementarios utilizando el ADN original como plantilla. La replicación del ADN en las células es un proceso muy complejo. En la replicación intervienen diversos factores. La PCR es una reacción de replicación del ADN realizada en un tubo de ensayo y el principio básico es similar al de la replicación intracelular del ADN, pero el sistema de reacción es relativamente sencillo.
II. Principio básico de la PCR
El principio básico de la PCR consiste en tomar el ADN a amplificar como plantilla, utilizar un par de fragmentos de oligonucleótidos complementarios a los extremos 5′ y 3′ de la plantilla como cebadores, bajo la acción de la ADN polimerasa extenderse a lo largo de la cadena de la plantilla según el mecanismo de replicación semiconservada hasta completar la nueva síntesis de ADN, y repetir este proceso para que el fragmento de ADN objetivo se amplifique.
III. Pasos básicos de la PCR
① Desnaturalización: Calentar el sistema de reacción a 95°C para desnaturalizar todo el ADN molde y convertirlo en ADN monocatenario
② Recocido: Disminuya la temperatura hasta la adecuada para recocer los cebadores en el ADN molde
③ Extensión: Aumenta la temperatura a 72°C y la ADN polimerasa cataliza la reacción de síntesis del ADN con el sustrato dNTP.
Los tres pasos anteriores se denominan ciclo, y dicho ciclo se repite 25-30 veces para obtener una gran cantidad de ADN diana.