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Prueba COVID-19

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¿Por qué utilizar un hisopo nasal más doloroso?

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Las pruebas de COVID-19 han entrado ya en nuestra vida cotidiana, pero muchas personas siguen teniendo grandes dudas sobre los principios de las pruebas de ácidos nucleicos. ¿Por qué las pruebas de ácidos nucleicos requieren el uso de un hisopo nasal? ¿Cuál es la razón de ello? Veámoslo desde la perspectiva del principio.

La técnica más utilizada para las pruebas de ácidos nucleicos es la RT-PCR (PCR cuantitativa en tiempo real, reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real), también llamada qPCR (reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa), que es en realidad una técnica muy madura en la práctica clínica. La qPCR (RT-PCR) es actualmente el método preferido para la cuantificación del ADN/ARN en el campo de la biología molecular.

A diferencia de la PCR convencional, la qPCR es un método capaz de cuantificar en tiempo real, lo que significa que puede controlar la cantidad exacta de ADN amplificado en la muestra en tiempo real. Sin embargo, en la PCR convencional, el ADN amplificado sólo puede detectarse después de la finalización de la amplificación (detección del punto final).

Para tomar el virus COVID-19 como ejemplo, el ARN viral puede ser utilizado como plantilla de amplificación, transcrito inversamente a ADNc, y luego amplificado por qPCR.

En la reacción de qPCR, la PCR que se amplifica se marca con un combustible fluorescente (comúnmente SYBR GREEN I) y la fluorescencia se detecta durante todo el proceso de qPCR (30-45 ciclos). Cuantas más moléculas de ADN haya en la muestra, más rápido aumentará la fluorescencia durante el ciclo de la PCR. La intensidad de la señal de fluorescencia de la qPCR es proporcional a la cantidad inicial de ADN, es decir, cuanto más virus haya en la muestra, antes se detectará la fluorescencia en el ciclo. El ciclo en el que se puede detectar la señal de fluorescencia se denomina Punto de Cruce (Cq para abreviar).

P2: La imagen muestra la amplificación de la qPCR (los dos primeros ciclos) que tiene lugar en un tubo de PCR. La qPCR tiene diferentes variantes de la molécula de señalización y se pueden implementar diferentes métodos para su etiquetado fluorescente. Los dos principios más comunes se muestran en la imagen. La sección de la izquierda muestra la variante de la nucleasa 5′, que utiliza el mecanismo FRET (transferencia de energía por resonancia de fluorescencia), en el que la fluorescencia del fluoróforo reportero (R) se transfiere al quencher (Q) y no se emite mientras el R y el Q estén juntos (como TaqMan). Cuando los dos se deslocalizan (cuando la sonda se elimina durante la extensión de la PCR por la actividad 5′-de la nucleasa de la TaqDNA polimerasa), el R queda libre para fluorescer y entonces puede ser detectado. La sección de la derecha representa una variante de qPCR que utiliza fluorescencia de intercalación (por ejemplo, SYBR Green). Se utilizan tintes de intercalación especiales que aumentan fuertemente la cantidad de fluorescencia emitida cuando se insertan en el dsDNA.

P3: Se muestran los gráficos de amplificación de cinco muestras (S1- S5). A medida que el ADN de cada muestra se amplifica, la fluorescencia aumenta en cada ciclo. En el ejemplo anterior, la muestra S1 contiene la mayor cantidad inicial de ADN diana, lo que provoca el aumento más rápido de la fluorescencia. La muestra S4 contiene el menor número de moléculas iniciales de ADN diana, mientras que la S5 no contiene ningún ADN diana.

En otras palabras, cuanto más virus haya en el hisopo nasofaríngeo, más fácil será detectar el nuevo coronavirus. Por lo tanto, en la práctica clínica, se aplicará un hisopo nasal para mayor precisión, y generalmente se considera que la cavidad nasal contiene una mayor carga viral.

Así pues, ¿prefieres utilizar un hisopo nasal o un hisopo faríngeo? ¡Díganos lo que piensa!