Proteinasa K

El héroe anónimo de la prueba de ácido nucleico COVID-19.

La proteinasa K es una potente enzima proteolítica aislada de Candida albicans que puede digerir la queratina natural, de ahí el nombre de proteinasa K. Pertenece a la familia S8 de la superfamilia de serina proteasa SB. El principal sitio de escisión de la proteinasa K es el enlace peptídico carboxi-terminal de los aminoácidos alifáticos y aromáticos, que tiene una alta actividad específica y es un reactivo clave para la extracción de ADN. La enzima es activa en un amplio rango de pH (4-12,5) ya alta temperatura (50-70 °C), y se usa ampliamente para el aislamiento y extracción de plásmido o ADN y ARN genómico.

Características técnicas

Fórmula molecular C29H27N2O12P

Peso molecular 626.504641

Condiciones de almacenamiento 2-8 ℃

Solubilidad H2O: 10 mg/mL, fácilmente soluble en agua

Morfología 28,9 kilodaltons

Peso molecular de la proteína >30U/mg, el rango de pH óptimo es de 7,5 a 8,0

Actividad enzimática >30U/mg, el rango óptimo de pH es 7.5-8.0, activo dentro de 0-70 ℃, la temperatura óptima de reacción es 65 ℃

La proteinasa K tiene actividad de superproteína hidrolasa, y la actividad no se inhibe con SDS (dodecilsulfato de sodio), urea, EDTA (ácido etilendiaminotetraacético), clorhidrato de guanidina, isotiocianato de guanidina, etc. Además, la actividad de la proteinasa K se puede mejorar con una cierto nivel de detergente. Estas propiedades hacen que la aplicación de la proteinasa K participe en diversos campos de la vida humana. Por ejemplo, en las industrias biológica y médica, la proteinasa K se usa en la extracción de ADN y ARN, el procesamiento de muestras de prehibridación en tecnología de hibridación in situ y, actualmente, es la más utilizada en pruebas de ácido nucleico de enfermedades infecciosas como COVID-19. . La aplicación de la Proteinasa K no solo se limita al diagnóstico médico y la biología, sino que también puede ser una alternativa a otras proteasas con un rango de acción más reducido bajo la premisa de producción industrial a gran escala, que puede ser utilizada en la industria del cuero, manipulación de alimentos (tiernización de la carne), desinfección del agua, producción de piensos, fabricación de papel, elaboración de cerveza (clarificación del vino), preparación de aminoácidos (degradación de las plumas), etc.

La proteinasa K está ocupando un lugar importante en la prueba de ácido nucleico COVID-19 que ahora está penetrando ampliamente en nuestra vida diaria.

La proteinasa K es un componente principal de la solución de muestreo de virus que escinde el virus para liberar ácidos nucleicos y eliminar la RNasa (enzima nucleolítica) para evitar la degradación del ARN del virus. La proteinasa K también puede inactivar el virus, de modo que la proteína del virus se desnaturalice e incluso se inactive, deje de ser infecciosa, para mejorar la seguridad del período de transporte y detección. En el proceso de extracción de ácido nucleico, la proteinasa K puede degradar la proteína unida al ácido nucleico y promover la separación del ácido nucleico, lo que desempeña un papel clave en el éxito de la producción de ácido nucleico.

Con el brote de la epidemia de COVID-19, ha aumentado la demanda de pruebas de ácido nucleico. Hasta fines de junio de 2020, se han completado casi 90 millones de pruebas de COVID-19 en China. A nivel mundial, el número es aún más impresionante. La concentración de trabajo de proteinasa K en los experimentos de extracción de ácidos nucleicos es de aproximadamente 50-200 μg/mL. Generalmente, se requieren alrededor de 100 μg de proteinasa K para extraer el ácido nucleico de una muestra, mientras que en la práctica, la proteinasa K se usa a menudo en cantidades más altas para aumentar la eficiencia de la extracción del ácido nucleico. Las pruebas de ácido nucleico de COVID-19 generan una gran demanda de proteinasa K. El equilibrio original de oferta y demanda de proteinasa K se rompió rápidamente y la proteinasa K se convirtió de la noche a la mañana en un material importante para la prevención de epidemias. En el pasado, la proteinasa K era mucho menos conocida que el papel que desempeñaba, y esta epidemia en curso ha hecho que las personas se den cuenta de que la proteinasa K es tan importante que es el héroe anónimo en esta batalla entre humanos y virus.La proteinasa K es una potente enzima proteolítica aislada de Candida albicans que puede digerir la queratina natural, de ahí el nombre de proteinasa K. Pertenece a la familia S8 de la superfamilia de serina proteasa SB. El principal sitio de escisión de la proteinasa K es el enlace peptídico carboxi-terminal de los aminoácidos alifáticos y aromáticos, que tiene una alta actividad específica y es un reactivo clave para la extracción de ADN. La enzima es activa en un amplio rango de pH (4-12,5) ya alta temperatura (50-70 °C), y se usa ampliamente para el aislamiento y extracción de plásmido o ADN y ARN genómico.

Características técnicas

Fórmula molecular C29H27N2O12P

Peso molecular 626.504641

Condiciones de almacenamiento 2-8 ℃

Solubilidad H2O: 10 mg/mL, fácilmente soluble en agua

Morfología 28,9 kilodaltons

Peso molecular de la proteína >30U/mg, el rango de pH óptimo es de 7,5 a 8,0

Actividad enzimática >30U/mg, el rango óptimo de pH es 7.5-8.0, activo dentro de 0-70 ℃, la temperatura óptima de reacción es 65 ℃

La proteinasa K tiene actividad de superproteína hidrolasa, y la actividad no se inhibe con SDS (dodecilsulfato de sodio), urea, EDTA (ácido etilendiaminotetraacético), clorhidrato de guanidina, isotiocianato de guanidina, etc. Además, la actividad de la proteinasa K se puede mejorar con una cierto nivel de detergente. Estas propiedades hacen que la aplicación de la proteinasa K participe en diversos campos de la vida humana. Por ejemplo, en las industrias biológica y médica, la proteinasa K se usa en la extracción de ADN y ARN, el procesamiento de muestras de prehibridación en tecnología de hibridación in situ y, actualmente, es la más utilizada en pruebas de ácido nucleico de enfermedades infecciosas como COVID-19. . La aplicación de la Proteinasa K no solo se limita al diagnóstico médico y la biología, sino que también puede ser una alternativa a otras proteasas con un rango de acción más reducido bajo la premisa de producción industrial a gran escala, que puede ser utilizada en la industria del cuero, manipulación de alimentos (tiernización de la carne), desinfección del agua, producción de piensos, fabricación de papel, elaboración de cerveza (clarificación del vino), preparación de aminoácidos (degradación de las plumas), etc.

La proteinasa K está ocupando un lugar importante en la prueba de ácido nucleico COVID-19 que ahora está penetrando ampliamente en nuestra vida diaria.

La proteinasa K es un componente principal de la solución de muestreo de virus que escinde el virus para liberar ácidos nucleicos y eliminar la RNasa (enzima nucleolítica) para evitar la degradación del ARN del virus. La proteinasa K también puede inactivar el virus, de modo que la proteína del virus se desnaturalice e incluso se inactive, deje de ser infecciosa, para mejorar la seguridad del período de transporte y detección. En el proceso de extracción de ácido nucleico, la proteinasa K puede degradar la proteína unida al ácido nucleico y promover la separación del ácido nucleico, lo que desempeña un papel clave en el éxito de la producción de ácido nucleico.

Con el brote de la epidemia de COVID-19, ha aumentado la demanda de pruebas de ácido nucleico. Hasta fines de junio de 2020, se han completado casi 90 millones de pruebas de COVID-19 en China. A nivel mundial, el número es aún más impresionante. La concentración de trabajo de proteinasa K en los experimentos de extracción de ácidos nucleicos es de aproximadamente 50-200 μg/mL. Generalmente, se requieren alrededor de 100 μg de proteinasa K para extraer el ácido nucleico de una muestra, mientras que en la práctica, la proteinasa K se usa a menudo en cantidades más altas para aumentar la eficiencia de la extracción del ácido nucleico. Las pruebas de ácido nucleico de COVID-19 generan una gran demanda de proteinasa K. El equilibrio original de oferta y demanda de proteinasa K se rompió rápidamente y la proteinasa K se convirtió de la noche a la mañana en un material importante para la prevención de epidemias. En el pasado, la proteinasa K era mucho menos conocida que el papel que desempeñaba, y esta epidemia en curso ha hecho que las personas se den cuenta de que la proteinasa K es tan importante que es el héroe anónimo en esta batalla entre humanos y virus.