Cribado de PCa de la interacción de la biblioteca de proteínas humanas

Cribado de PCa de la interacción de la biblioteca de proteínas humanas

Principio de complementariedad de fragmentos de proteínas Tecnología PCA

Las proteínas a menudo no completan sus funciones de forma independiente en las células, sino que suelen interactuar con otras proteínas para formar complejos, con el fin de completar funciones específicas en un tiempo y espacio concretos. Comprender la interacción entre proteínas, especialmente el cribado a gran escala y de alto rendimiento de la interacción proteína-proteína, y luego representar el mapa de red de la interacción proteína-proteína es de una importancia insustituible para revelar la función de una proteína y, finalmente, aclarar el mecanismo molecular de diversas actividades vitales en las células.

El ensayo de complementación de proteínas (PCA) es una nueva tecnología para analizar de forma intuitiva y rápida la interacción y localización de proteínas en células vivas. El mecanismo de este método es el siguiente: sólo las proteínas con estructura completa pueden realizar sus funciones. Sin embargo, cuando la proteína funcional se divide en mitades N-terminal y C-terminal, ninguna de las mitades puede desempeñar su función por sí sola, pero si está lo suficientemente cerca en el espacio, puede complementar y restaurar la función original. Conecte los dos fragmentos inactivos en los extremos N y C con la proteína diana respectivamente. Si las dos proteínas diana interactúan, los dos fragmentos de la proteína funcional segmentada estarán próximos en el espacio y volverán a formar la proteína con actividad funcional. Si la proteína diana interactúa puede determinarse detectando la actividad. De acuerdo con las necesidades de diferentes experimentos, las proteínas funcionales utilizadas para PCA incluyen la luciferasa y la proteína fluorescente.

Características y ventajas de la tecnología PCA biológica de Meige

La biblioteca de PCA de la empresa incluye 18000 proteínas humanas, que pueden detectar rápida y fácilmente la interacción de proteínas en células humanas, así como la interacción entre proteínas patógenas y proteínas del huésped humano. Basándose en la tecnología de complementariedad de fragmentos de proteínas, la empresa ha obtenido la patente nacional de invención por cribado de alto rendimiento de interacciones proteína-proteína, que tiene las siguientes características y ventajas:

1. Detección directa e in situ de interacciones proteína-proteína en células vivas.

2. La sensibilidad es lo suficientemente alta como para detectar la interacción proteína-proteína equivalente al nivel de expresión endógena.

3. Pueden detectarse interacciones proteína-proteína transitorias e indirectas.

4. Utilizando software bioinformático, podemos generar fácil y rápidamente los resultados del análisis de Shengxin y dibujar el mapa de la red de interacción proteína-proteína

Pasos de la tecnología biológica PCA de Meige:

1. Clonar el gen a analizar en el vector de expresión que contiene el N-terminal de la proteína funcional para construir el plásmido cebo;

2. Transformar el plásmido cebo en células y seleccionar las células transformadas;

3. El plásmido de la biblioteca (que contiene 18000 genes humanos y se clonó en el vector de expresión que contiene el C-terminal de la proteína funcional) se transformó en las células que expresaban el plásmido cebo;

4. Cribado de alto rendimiento e identificación de proteínas que interactúan con el cebo mediante citometría de flujo o sistema de información de luciferasa.

5. Los resultados del análisis bioinformático proporcionan la lista de proteínas que interactúan con las proteínas cebo.

6. Presentar el informe experimental (incluyendo el proceso de operación experimental, datos y gráficos), y presentar la lista de proteínas que interactúan con las proteínas cebo.

7. (opcional) Verificar además la proteína que interactúa con el cebo mediante PCA o inmunofluorescencia celular o inmunocoprecipitación

El cliente deberá proporcionar la clonación del gen con la secuencia correcta y la información pertinente. Si el gen de la proteína cebo está clonado en la biblioteca de la empresa, no es necesario proporcionarlo.

Ciclo: el ciclo del experimento de cribado de PCa de la interacción entre cada proteína y la biblioteca es de 90 días laborables.

Enviar al finalizar el servicio:

1). Informe de servicio técnico (proceso de operación experimental, datos y gráficos)

2). Lista de proteínas que interactúan con las proteínas cebo